Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 1:37 min. • August 7th, 2025
Comece com uma cultura primária do mesencéfalo de embriões de ratos, contendo neurônios dopaminérgicos que superexpressam alfa-sinucleína mutada.
Substituir os meios dos alvéolos de tratamento por meios frescos que contenham o composto de ensaio e os dos alvéolos de controlo por meios simples. Em seguida, incube.
No controle, a alfa-sinucleína forma agregados tóxicos nos neurônios dopaminérgicos, causando retração dos neuritos e levando à morte neuronal.
No tratamento, o composto de teste interage com a alfa-sinucleína, impede sua agregação, preserva a estrutura dos neuritos e fornece neuroproteção.
Fixe e permeabilize as células e, em seguida, bloqueie os locais de ligação não específicos.
Incubar com anticorpos primários para marcar todos os neurônios, com marcação adicional para neurônios dopaminérgicos.
Lave as células e adicione anticorpos secundários marcados com fluoróforo específicos para os anticorpos primários.
Usando um microscópio de fluorescência invertida, conte os neurônios dopaminérgicos marcados diferencialmente e, em seguida, mude para um microscópio confocal para medir o comprimento dos neuritos.
Uma contagem mais alta de neurônios dopaminérgicos com neurites intactos no tratamento em comparação com os controles confirma o potencial neuroprotetor do composto de teste.