Entrega viral direcionada a neurônios corticoespinhais em um rato neonatal para estudar lesão medular

Comece com um rato neonatal anestesiado com uma medula espinhal cervical exposta cirurgicamente.

Este rato foi injetado com um vírus anterógrado que codifica um receptor projetado e uma proteína fluorescente, o vírus tem como alvo os neurônios do trato corticoespinhal (CST) no córtex somatomotor do cérebro.

Identifique a linha média da medula espinhal usando a artéria espinhal.

Posicione uma agulha de vidro contendo um vírus retrógrado, que codifica uma enzima recombinase, atrás da lâmina espinhal alvo onde residem os terminais do axônio CST.

Abaixe a agulha na medula espinhal e injete o vírus.

Deixe o vírus se difundir, retire lentamente a agulha e suture a incisão.

O vírus entra no terminal do axônio CST e viaja retrógradamente para o corpo celular, onde expressa a enzima recombinase.

Essa enzima ativa o transgene entregue pelo vírus anterógrado, permitindo a expressão do receptor projetista e da proteína fluorescente apenas em neurônios duplamente infectados. Este método permite a análise direcionada de neurônios CST na lesão da medula espinhal.

Para injeções diretas na medula espinhal, use a ponta da agulha de injeção de vidro para aproximar a linha média da medula espinhal, identifica