Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:24 min. • August 29th, 2025
Comece com um mouse anestesiado em um quadro estereotáxico com a cabeça inclinada.
Uma incisão no couro cabeludo no camundongo expõe a dura-máter que cobre a cisterna magna, um espaço cheio de líquido cefalorraquidiano ou LCR entre o cerebelo e o tronco encefálico.
Usando uma pinça, segure a dura-máter e crie uma pequena abertura para acessar a cisterna magna.
Use um cotonete estéril para remover o excesso de LCR.
Identifique o ponto de referência anatômico onde a medula espinhal se conecta ao tronco encefálico e, em seguida, determine as coordenadas estereotáxicas.
Abaixe o braço estereotáxico que segura a micropipeta, que contém a solução terapêutica.
Avance a micropipeta através da cisterna magna até o tronco encefálico nas coordenadas predeterminadas.
Injete a solução lentamente e segure a pipeta brevemente para evitar o refluxo.
A solução terapêutica atinge diretamente as regiões do tronco encefálico e da medula espinhal superior, que são difíceis de alcançar usando métodos estereotáxicos padrão.
Veja a superfície dorsal do tronco encefálico com pontos de referência detalhados através da dura-máter aberta.
Use a pinça angular para agarrar a dura-máter que se estende do osso occipital até o atlas e, em seguida, use a tesoura de mola para fazer uma pequena abertura de aproximadamente 0,5 a 1,5 milímetros na dura-máter. Assim que a dura-máter for aberta, drene o excesso de líquido cefalorraquidiano com um cotonete estéril. O obex, o ponto onde o canal central se abre para o quarto ventrículo, é o ponto zero ântero-posterior e mediolateral padrão.
Posicione a pipeta ou seringa no alvo usando o braço estereotáxico. Abaixe o braço do dorsal na superfície dorsal que se forma a partir do ponto zero dorsoventral. Em seguida, baixe a pipeta no tronco encefálico e injete a solução.
Deixe a agulha no lugar por um a cinco minutos após a injeção para evitar um rastro de agulha ao usar volumes entre 3 e 50 nanolitros. Em seguida, levante a pipeta ou seringa usando o braço estereotáxico e repita isso para vários alvos.