Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:47 min. • August 29th, 2025
Prenda um camundongo em uma estrutura estereotáxica com um cérebro exposto cirurgicamente contendo um glioblastoma esferóide pré-implantado.
Aplique solução salina no cérebro exposto para manter a hidratação dos tecidos.
Posicione a sonda flexível sobre a camada salina, garantindo que suas almofadas de contato fiquem apoiadas nas costas do mouse e os eletrodos se alinhem acima do glioblastoma.
A sonda consiste em um substrato de polímero fino e flexível com eletrodos de ouro padronizados revestidos com polímero condutor biocompatível, garantindo desempenho elétrico ideal e compatibilidade de tecido.
Absorva o excesso de solução salina, deixando apenas uma camada fina.
Aplique adesivo de silicone para estabilizar os eletrodos e, em seguida, coloque uma lamínula.
Aplique cimento dental ao redor da lamínula e prenda as almofadas de contato nas costas do mouse.
Construa um poço de cimento para inserção de fluido.
Posteriormente, administrar analgesia pós-cirúrgica e manter suporte térmico para a recuperação do camundongo.
Os eletrodos implantados fornecem pulsos elétricos acima do glioblastoma para terapia de campo elétrico pulsado direcionada em aplicações neuroterapêuticas.
Coloque uma gota de DPBS para cobrir a craniotomia. Coloque o eletrodo flexível na gota do DPBS e coloque suavemente a parte de trás da sonda com as almofadas de contato nas costas do mouse. Absorva a gota de DPBS com um pequeno pedaço de papel até que a sonda possa ficar plana na dura-máter e siga a curvatura do cérebro, garantindo que a pequena camada de solução salina permaneça abaixo dos eletrodos para atuar como uma barreira contra o derramamento de cola.
Coloque uma pequena gota de adesivo de silicone na sonda e cubra-a com uma lamínula redonda de cinco milímetros. Empurre a lamínula para baixo até que o silicone esteja uniformemente distribuído e a distância entre a lamínula e a sonda seja mínima. Em seguida, aguarde 30 segundos para que o silicone solidifique.
Para prender a lamínula, aplique rapidamente supercola nas laterais e empurre-a para baixo até que a cola fique sólida. Aplique super cola no pescoço da sonda usando um palito, cuidando para que a super cola seja puxada sob o pescoço para fornecer suporte estável. Cubra o crânio com cimento dental para construir uma tampa crônica e tome cuidado especial para cobrir apenas as bordas da tampa de vidro.
Levante a parte de trás da sonda e aplique cimento sob o gargalo da sonda. Resto da sonda no cimento antes de curar. Empurre suavemente o gargalo da sonda para baixo para colocar sua superfície no mesmo nível da lamínula e não no caminho da objetiva do microscópio durante o experimento.
Cubra a parte superior do pescoço da sonda com não mais de 1,5 milímetros de camada de cimento dental para obter uma fixação firme na sonda. Construa um poço de cimento apresentando uma crista de 1,5 milímetro de um a dois milímetros ao redor da lamínula para criar uma bacia para o fluido de imersão para as imagens de dois fótons. Após a cura do cimento, administre analgesia pós-cirúrgica e mantenha o animal aquecido até a recuperação, envolvendo-o em uma toalha de papel e colocando-o próximo a uma lâmpada infravermelha.