Microinjeção de tetrodotoxina no cérebro de uma rato fêmea acordada para inibir a ovulação

Pegue microsseringas cheias de água destilada e conecte-as a tubos ligados a microinjetores.

Pressione os êmbolos da microsseringa até que uma gota de água apareça nas pontas do microinjetor e, em seguida, retraia ligeiramente os êmbolos para criar uma bolsa de ar nos tubos.

Coloque as almofadas embebidas em uma substância inativadora de toxinas e filmes de parafina acima delas.

Pipete a tetrodotoxina no parafilme e aspire-a para os microinjetores.

Monte as microsseringas na bomba de microinjeção e avance os êmbolos até que apareça uma gota nas pontas dos microinjetores. Descarte as gotas.

Segure uma rata acordada com cânulas guia implantadas em seu hipotálamo.

Insira os microinjetores nas cânulas guia.

Realize a microinjeção.

A tetrodotoxina bloqueia os canais de sódio nos neurônios hipotalâmicos, impedindo o disparo neuronal.

Essa inibição suprime os neurônios que secretam o hormônio liberador de gonadotrofina, inibindo assim a ovulação.

Deixe os microinjetores no lugar para evitar o refluxo. Em seguida, remova-os e recoloque as tampas das cânulas guia.

Configure a bomba de microinjeção com a taxa de infusão e o tempo total de injeção. Em seguida, encha 2 seringas Hamilton de 10 microlitros