JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 2:30 min • August 29th, 2025
Comece com um rato neonatal anestesiado colocado em uma almofada de aquecimento com um nervo ciático exposto.
Levante o local distal do nervo e injete uma solução de DNA de plasmídeo misturada com um corante. O corante ajuda a rastrear a entrega do plasmídeo.
Coloque um eletrodo do tipo pinça ao redor do nervo, mantendo um pequeno espaço entre os braços do eletrodo.
Introduza solução salina nessa lacuna para condução de corrente.
Aplique um pulso elétrico ao redor das fibras nervosas que cria poros transitórios da membrana nas células de Schwann. Em seguida, inverta as posições dos eletrodos e aplique um segundo pulso elétrico. Isso aumenta a entrada de DNA do plasmídeo através dos poros.
Após a eletroporação, a membrana celular sela novamente e aprisiona o plasmídeo.
Limpe o local, sele a incisão na pele, desinfete-a e permita que o rato se recupere.
Mais tarde, o DNA do plasmídeo se transloca para o núcleo e se integra ao DNA da célula de Schwann, permitindo a transferência bem-sucedida do gene.
Puxe suavemente o lado distal do nervo usando uma agulha para levantar o nervo exposto. Insira a micropipeta de vidro no local distal do nervo e injete a solução de DNA aplicando uma leve pressão positiva até que o nervo pareça verde. Em seguida, coloque um eletrodo de platina do tipo pinça a cerca de um a dois milímetros do nervo.
Preencha a lacuna entre o eletrodo e o nervo com solução de cloreto de sódio a 0,9%. Aplique pulsos elétricos no local da injeção usando um eletroporador. Após o primeiro conjunto de pulsos, inverta o eletrodo e aplique outro conjunto de pulsos.
Em seguida, limpe o local da eletroporação com solução de cloreto de sódio a 0,9%. Após a eletroporação, feche a incisão com cola de cianoacrilato. Em seguida, limpe a ferida com iodopovidona.
Remova a máscara facial do animal e mantenha-a no aquecedor elétrico por pelo menos uma hora para permitir a recuperação total da anestesia