Entrega de medicamentos oftálmicos para neuromodulação não invasiva em um modelo de camundongo

Comece com um camundongo geneticamente modificado cujos neurônios do hipocampo expressam receptores projetados ativados exclusivamente por drogas projetadas ou DREADDs.

Esses receptores projetados respondem seletivamente a drogas de teste sintéticas, enquanto permanecem sem resposta a moléculas endógenas.

Limpe o mouse regularmente para minimizar o estresse e aclimatá-lo ao procedimento.

Em seguida, pese o mouse para calcular a dosagem correta do medicamento.

Durante o manuseio do mouse, use uma luz vermelha fraca para evitar a interrupção circadiana.

Gentilmente, esfregue o mouse para imobilizá-lo.

Usando uma pipeta, pegue a solução do medicamento de teste e forme uma gota na ponta. Agora, aproxime-se do olho

e solte a gota em sua superfície.

Retorne o mouse para sua gaiola inicial. Repita a administração do medicamento várias vezes.

A droga é absorvida pelo olho e entra no cérebro.

Em seguida, atravessa a barreira hematoencefálica e atinge a região do hipocampo. Mais tarde, ele se liga aos receptores DREADD e ativa os neurônios, permitindo uma neuromodulação precisa e não invasiva.

Para administração repetitiva de CNO, começando quatro semanas após a injeção, aclimatar os animais ao manuseio esfregando cada camundongo três minutos ao dia por três a quatro dias antes da administração do colírio. Quando os camundongos estiverem acostumados ao manuseio, pese cada camundongo para determinar a quantidade apropriada de CNO a ser administrada para atingir um miligrama de CNO por quilograma de concentração de peso corporal.

Duas horas antes de as luzes se apagarem durante a fase inativa, carregue de um a três microlitros da solução de CNO preparada em uma micropipeta P10 e imobilize o mouse por meio de scruffing. Expulse lentamente a solução até que uma gota estável se forme na ponta da pipeta e aproxime cuidadosamente a gota da córnea até que a solução seja administrada sem tocar a ponta da pipeta no olho do camundongo. Em seguida, retorne o mouse à sua gaiola de origem antes de aplicar o colírio CNO no olho do próximo animal.

Nos casos em que o CNO precisa ser entregue durante a fase ativa do camundongo, certifique-se da presença de uma luz vermelha fraca para o manuseio adequado do animal e entrega do CNO.