Entrega de medicamentos direcionados em um modelo de camundongo via injeção de cisterna magna

Comece com um camundongo anestesiado expressando um gene marcador fluorescente e preso em uma estrutura estereotáxica.

A cabeça é inclinada para baixo para facilitar o acesso à cisterna magna, o líquido cefalorraquidiano ou o espaço preenchido pelo LCR entre o cerebelo e o tronco encefálico.

Aplique pomada para os olhos, raspe o pescoço e esterilize.

Faça uma incisão na linha média para expor a membrana que cobre a cisterna magna.

Retraia os tecidos com um separador para acessar a cisterna magna.

Pegue uma microsseringa cheia de um medicamento indutor e equipada com uma agulha dobrada.

Insira a agulha e perfure a membrana para alcançar a cisterna magna.

Injete o medicamento lentamente para uma dispersão uniforme no LCR.

A droga entra nas células da superfície cerebral e desencadeia a expressão do gene marcador, produzindo proteínas fluorescentes vermelhas.

O fluxo do LCR impede a difusão da droga em regiões cerebrais mais profundas.

A imagem de fluorescência confirma a marcação seletiva de células de superfície, demonstrando uma entrega direcionada de medicamentos para regiões expostas ao LCR.

Anestesie o animal na câmara de isoflurano.

Em seguida, ajuste o suporte da cabeça do mouse para que o bocal fique aproximadamente em um ângulo de 30 graus da superfície da mesa cirúrgica e fixe a cabeça do animal no suporte. Para melhorar a acessibilidade à cisterna magna, posicione o corpo do animal a aproximadamente 30 graus da superfície da mesa com a cabeça inclinada para baixo, o que estabelecerá um ângulo de 120 graus com o resto do corpo e estenderá a nuca para facilitar o acesso à cisterna magna. Assim que o animal estiver posicionado corretamente, aplique pomada oftálmica, raspe a nuca e higienize a área com lenços umedecidos com álcool e Betadine.

Use uma tesoura cirúrgica para fazer uma incisão na linha média começando no nível do osso occipital e estendendo-se posteriormente. Separe suavemente o tecido conjuntivo superficial e os músculos do pescoço, puxando lateralmente a partir da linha média com uma pinça de ponta fina que exporá a membrana dural que cobre a cisterna magna. Posicione um pequeno separador cirúrgico para permitir a visualização da cisterna magna durante todo o procedimento.

Identifique a extremidade caudal do osso occipital e insira a agulha previamente dobrada imediatamente abaixo. Uma vez perfurada a dura-máter, deixe a ponta dobrada da agulha penetrar por baixo da superfície, puxando suavemente a seringa para cima e paralelamente ao corpo do animal, o que garantirá uma melhor estabilidade. Injete o composto lentamente para evitar interferência no fluxo natural do líquido cefalorraquidiano.

Após a injeção, deixe a agulha descansar por um minuto e, em seguida, remova-a cuidadosamente com a ajuda de uma pinça de ponta fina.