JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 3:13 min • August 29th, 2025
Pegue uma mistura de vírus contendo um gene desejado para transdução e um corante de rastreamento em um tampão.
Aspire a mistura de corante de vírus em um capilar de ponta fina.
Pegue um camundongo grávida anestesiado com uma região abdominal raspada.
Desinfete a pele com etanol, seguido de uma solução de betadina.
Faça uma incisão na linha média para expor a cavidade abdominal e coloque um filme de parafina sobre ela.
Exponha os chifres uterinos e despeje tampão sobre eles para evitar o ressecamento.
Observe a ordem e a posição dos embriões. Ajuste a posição do embrião dentro do saco uterino para acessar os locais de injeção.
Injete a mistura de corante viral na medula espinhal e nos ventrículos cerebrais.
Garanta uma injeção precisa visualizando a distribuição do corante.
Coloque os cornos uterinos de volta na cavidade abdominal e despeje um pouco de tampão.
Sutura a cavidade abdominal, seguida da pele.
O vírus injetado entra na célula hospedeira, liberando o gene alvo e permitindo sua expressão.
Comece carregando uma ponta capilar personalizada contendo quatro vezes 10 a 11 partículas virais de revestimento de vírus adeno-associado tipo 1 para o alvo desejado e rotulada com corante Fast Green em um tubo de aspiração. Adicione 15 microlitros das partículas de vírus adeno-associadas marcadas no capilar.
Em seguida, confirme a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé em um camundongo embrionário anestesiado dia 14,5 e desinfete a pele. Use uma pinça de íris serrilhada curva e uma tesoura reta de carboneto de tungstênio para fazer uma incisão na pele ao longo da linha mediana. Usando uma pinça Dumont reta para segurar a parede peritoneal, continue ao longo da linha alba com uma tesoura Vannas reta e coloque um pedaço de filme de parafina fenestrada sobre a abertura abdominal e use um dispositivo semelhante a uma colher para expor os chifres uterinos sem danificar os embriões dentro dos chifres.
Depois de aplicar algumas gotas de PBS a 37 graus Celsius nos cornos uterinos, inspecione os embriões em busca de danos ou malformações dentro do saco uterino. Vire os embriões cuidadosamente dentro de seus sacos até que a posição desejada para cada injeção seja alcançada. Quando os embriões estiverem no lugar, injete de um a dois microlitros da solução de partículas de vírus marcada com Fast Green em cada embrião.
Depois que todos os embriões tiverem sido injetados, coloque os cornos uterinos de volta na cavidade abdominal e adicione algumas gotas de PBS a 37 graus Celsius no abdômen. Em seguida, use suturas de poliamida 6-0 para fechar a parede peritoneal e suturas de poliamida 3-0 e pinça hemostática de Mosquito de Halsted para fechar a pele.