Transdução viral in utero em camundongo

Pegue uma mistura de vírus contendo um gene desejado para transdução e um corante de rastreamento em um tampão.

Aspire a mistura de corante de vírus em um capilar de ponta fina.

Pegue um camundongo grávida anestesiado com uma região abdominal raspada.

Desinfete a pele com etanol, seguido de uma solução de betadina.

Faça uma incisão na linha média para expor a cavidade abdominal e coloque um filme de parafina sobre ela.

Exponha os chifres uterinos e despeje tampão sobre eles para evitar o ressecamento.

Observe a ordem e a posição dos embriões. Ajuste a posição do embrião dentro do saco uterino para acessar os locais de injeção.

Injete a mistura de corante viral na medula espinhal e nos ventrículos cerebrais.

Garanta uma injeção precisa visualizando a distribuição do corante.

Coloque os cornos uterinos de volta na cavidade abdominal e despeje um pouco de tampão.

Sutura a cavidade abdominal, seguida da pele.

O vírus injetado entra na célula hospedeira, liberando o gene alvo e permitindo sua expressão.

Comece carregando uma ponta capilar personalizada contendo quatro vezes 10 a 11 partículas virais de revestimento de vírus adeno-associado tipo 1 para o alvo desejado e rotulada com corante Fast Gre