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Microbiologia
0 vistas • 2:25 min • August 29th, 2025
Comece com uma matriz de micropoços revestida com uma camada inerte em sua superfície plana.
Adicione uma suspensão de células bacterianas à matriz, permitindo que elas se depositem nos poços.
Retire o revestimento para remover as células ligadas à superfície, retendo as localizadas dentro dos poços.
Em seguida, prenda a matriz de micropoços entre os espaçadores.
Pegue uma lâmina com um revestimento não adesivo e deposite uma solução precursora de hidrogel contendo um polímero sintético e um reticulador dissolvido em um tampão.
Inverta a lâmina na matriz e incuba. O reticulador reage com o polímero para formar um hidrogel poroso que aprisiona as células.
Remova a lâmina e coloque a matriz em um meio que suporte o crescimento bacteriano e contenha antibióticos para evitar contaminação.
As bactérias confinadas proliferam em colônias espacialmente distintas.
O hidrogel contém ligações cruzadas fotodegradáveis que se quebram com a exposição à luz ultravioleta, permitindo a degradação direcionada do hidrogel para extração seletiva de colônias bacterianas.
Semear 700 microlitros de suspensões de células bacterianas com OD 600 de 0,1 sobre o substrato da matriz de micropoços e fazer a solução precursora de hidrogel conforme demonstrado anteriormente usando 12,5 microlitros de ATGN salino tampolado com fosfato de pH oito. Pipete 12,5 microlitros da solução precursora em uma lâmina de vidro perfluoroalquilada não reativa e coloque dois espaçadores de aço de 38 micrômetros em dois lados opostos do substrato da matriz de micropoços inoculados com células. Em seguida, inverta a lâmina de vidro perfluoroalquilada com a gota da solução precursora e coloque uma gota no meio do substrato do micropoço.
Quando o hidrogel for formado após uma incubação de 25 minutos à temperatura ambiente, remova suavemente a lâmina de vidro do substrato do micropoço e coloque o substrato em uma placa de Petri contendo meio ATGN suplementado com antibiótico.