Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:30 min. • August 29th, 2025
Comece com uma placa de vários poços contendo macrófagos pré-tratados expostos a vesículas bacterianas da membrana externa de Legionella pneumophila, ou OMVs.
Adicione Legionella pneumophila em uma proporção definida de bactéria para célula hospedeira para infectar os macrófagos tratados com OMV.
Durante a incubação, os macrófagos internalizam as bactérias dentro de fagossomos ligados à membrana.
O pré-tratamento com OMV altera a sinalização dos macrófagos, inibindo a maturação dos fagossomos.
Isso facilita a formação de um vacúolo contendo Legionella, que protege a bactéria e permite a replicação intracelular.
Adicione um detergente e incube para lisar os macrófagos. Isso libera as bactérias intracelulares no meio.
Listre o lisado diluído em uma placa de ágar enriquecida com nutrientes.
Durante a incubação, as bactérias crescem e formam colônias visíveis.
Conte as colônias para determinar as unidades formadoras de colônias, ou UFCs, que representam o número de bactérias viáveis.
Compare as contagens de UFC entre macrófagos tratados com OMV e não tratados.
Uma UFC mais alta em macrófagos tratados com OMV em comparação com macrófagos não tratados indica que os OMVs facilitam a sobrevivência d
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