Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:25 min. • August 29th, 2025
Comece com cepas bacterianas patogênicas cultivadas em placas de ágar separadas.
Cada cepa carrega diferentes mutações em genes responsáveis pela produção de uma cápsula, uma camada protetora de polissacarídeos.
Transfira colônias individuais das placas para tubos separados contendo um meio líquido rico em nutrientes e incuba.
Durante a incubação, as bactérias entram na fase de crescimento exponencial e expressam os genes produtores de cápsulas.
Mutações nesses genes resultam em variações na produção de cápsulas, gerando células não encapsuladas, fracamente encapsuladas e fortemente capsuladas.
Transfira as culturas e centrifugue para pellet as células.
As células não encapsuladas e fracamente capsuladas formam pellets densos, enquanto as células fortemente capsuladas,
devido à sua camada de cápsula hidratada, formam um pellet menos denso.
Remova cuidadosamente o sobrenadante para evitar a perda das células fortemente capsuladas.
Adicione um tampão, centrifugue novamente e descarte o sobrenadante para eliminar o meio residual.
Ressuspenda as células no tampão para estabilizar as bactérias sem promover um maior crescimento, preservando assim a estrutura da cápsula.
Selecione uma única colônia de um prato de estoque com uma alça estéril e inocule 10 mililitros de um caldo apropriado.
Incube a cultura durante a noite. Em seguida, transfira a cultura para um tubo de 15 mililitros e centrifugue. Em seguida, descarte o sobrenadante e ressuspenda o pellet em dois mililitros de PBS.
Repita a centrifugação e descarte o sobrenadante resultante. Em seguida, suspenda novamente o pellet em dois mililitros de PBS.