Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:37 min. • August 29th, 2025
Pegue as colônias bacterianas transformadas com um plasmídeo contendo um gene induzível.
Escolha uma única colônia para inocular meios líquidos frescos.
Incubar com agitação para oxigenação e crescimento bacteriano homogêneo.
Use uma amostra de cultura diluída para medir a absorbância e estimar a densidade celular.
Pegue uma placa de poço com fundo de vidro com paredes pretas para evitar diafonia leve entre as amostras, garantindo uma quantificação precisa da luminescência.
Adicione a cultura bacteriana com a concentração celular desejada nos poços.
Adicione um antibiótico para manter a retenção de plasmídeo.
Adicione um indutor para iniciar a expressão gênica.
O gene codifica uma enzima que reage com uma proteína bacteriana específica para produzir luz, dando à bactéria propriedades bioluminescentes.
Coloque uma tampa na placa para evitar a evaporação antes de colocá-la em um leitor de placas com temperatura controlada com modo de agitação constante.
Em intervalos regulares, registre a absorbância para medir o número de células e a intensidade da luz para monitorar a bioluminescência. Correlacione a densidade celular com a bioluminescência.
Inocule 3 mililitros de meio com uma única colônia
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