Cultivo de bactérias Magnetospirillum e avaliação de seu comportamento magnetotático

Magnetospirillum são bactérias móveis que prosperam em baixo oxigênio.

Eles produzem nanocristais magnéticos que atuam como dipolos magnéticos, ajudando-os a navegar no campo geomagnético em direção a uma concentração ideal de oxigênio.

Para cultivar Magnetospirillum, tome meios líquidos livres de oxigênio. Injete um volume controlado de oxigênio para estabelecer condições microaeróbicas, adicionar bactérias e incubar.

Com o tempo, a turbidez aumenta, indicando crescimento bacteriano.

Para preparar uma cultura semi-sólida, use um meio contendo um indicador de oxigênio rosa que se torna incolor na zona de baixo oxigênio, marcando a interface óxico-anóxica (OAI) com uma concentração ideal

de

oxigênio.

Inocule as bactérias no OAI, sele o tubo e incuba.

As bactérias se multiplicam para formar uma faixa que migra para cima à medida que o oxigênio é consumido.

Para avaliar o comportamento magnetotático, prepare uma gota pendurada da bactéria cultivada e coloque um ímã perto dela.

Sob um microscópio, observe a natação direcional em direção ao ímã e a reversão do movimento quando o ímã é invertido.

Para inocular as cepas MSR-1, AMB-1 e MS-1 em meio líquido, acenda as tampas dos frascos de oxigênio e meio fresco aplicando etanol nas rolhas e passando-as pela chama de um bico de Bunsen.

Usando uma seringa estéril e uma agulha, extraia um mililitro de oxigênio do frasco de oxigênio e transfira-o para o frasco de meio fresco. Se utilizar o inóculo de outra cultura cultivada num frasco de vidro, chame ambos os frascos. Em seguida, inocule um mililitro da cultura mais antiga no meio fresco.

Incube a cultura a 32 graus Celsius e inocule-a em meio fresco após quatro a sete dias. Para inocular MSR-1 em gradiente de oxigênio, meio semissólido, verificar se o tubo de meio fresco apresenta um OAI bem definido, materializado por uma interface rosa a incolor cerca de um a três centímetros abaixo da superfície do meio. Se o inóculo for proveniente de outra cultura semissólida com gradiente de concentração de oxigênio, colha a bactéria aspirando 50 microlitros da cultura com uma ponta de pipeta estéril colocada na faixa formada pela bactéria.

Inocular lentamente essas bactérias no OAI no meio fresco, evitando perturbar a interface. Sele o tubo e deixe as bactérias crescerem entre 25 graus Celsius e 30 graus Celsius. Para garantir que as bactérias sejam magnéticas e modais, coloque uma gota de cultura na lamínula do microscópio.

Vire a lamínula e instale-a em um anel de vedação apoiado em uma lâmina de vidro. Certifique-se de que a gota não toque na corrediça inferior. Coloque a gota suspensa sob um microscópio e concentre-se em uma borda da gota.

Coloque o pólo sul de um ímã perto dessa borda e observe as bactérias nadarem em direção à borda. Vire o ímã para fazê-los nadar na direção oposta.