Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:46 min. • September 26th, 2025
Pegue uma cultura de Mycobacterium tuberculosis cultivada em um meio limitante de ferro para aumentar a secreção de vesículas extracelulares contendo sideróforos, um quelante de ferro.
Centrifugue para peletar as bactérias.
Colete o sobrenadante e filtre-o para remover as bactérias residuais.
Transfira o filtrado para um sistema de ultrafiltração agitado e filtre para remover o excesso de meio e concentrar os EVs.
Centrifugue o concentrado em sedimentar os detritos celulares.
Transfira o sobrenadante para um tubo de ultracentrífuga e centrifugue para coletar o pellet EV.
Descarte o sobrenadante, ressuspenda o pellet em um tampão e misture-o com um meio de gradiente de densidade concentrado para formar a camada inferior.
Sobreponha com concentrações decrescentes do meio gradiente para criar um gradiente de densidade descontínuo.
Adicione tampão na parte superior e centrifugue. Os EVs migram para a camada que corresponde à sua densidade flutuante.
Colete cada fração em um tubo separado.
A fração purificada com EVs contendo sideróforo está pronta para estudos a jusante.
Transfira a cultura para cinco tubos de centrífuga cônicos de 225 mililitros e centrifugue a 2.850 vezes g por sete minutos a 2
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