Isolamento de Vesículas Extracelulares Bacterianas Usando Cromatografia de Exclusão de Tamanho

Pegue uma cromatografia de exclusão de tamanho ou coluna SEC repleta de esferas de resina porosa de tamanho definido. Ele contém um reservatório de amostra no topo.

Adicione solução salina tamponada com fosfato ou PBS para equilibrar as esferas da coluna e descarte o fluxo.

Carregue um filtrado de cultura bacteriana concentrado que contenha vesículas extracelulares ou EVs, proteínas secretadas e contaminantes.

EVs são nanovesículas à base de lipídios que carregam moléculas bioativas e são secretadas por bactérias.

Assim que o filtrado entrar nas contas, adicione PBS para conduzi-lo através do leito de resina.

Rejeitar o eluído inicial que contém grandes contaminantes não vesiculares.

Coloque um tubo de coleta sob a saída e adicione PBS sequencialmente.

Os EVs de grande porte evitam os poros menores da resina, movem-se pelos espaços interpartículas entre os grânulos e eluem primeiro.

Proteínas menores e contaminantes entram nos poros, seguem caminhos mais longos e eluem mais tarde.

Colete as frações de eluição precoce contendo EVs e armazene-as para análise.

Para o isolamento dos EVs, realize a cromatografia de exclusão de tamanho, ou SEC, usando uma pequena coluna com um volume de leito de 1