Transinfecção bacteriana in vitro de células T via formação de sinapse imunológica
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:05 min. • September 26th, 2025
Comece com poços contendo células T CD4 + expressando receptores específicos para o peptídeo de ovoalbumina ou OVAp.
No poço de controle negativo, coloque uma inserção de membrana porosa.
Em um tubo, pegue células dendríticas infectadas com bactérias e carregadas com OVAp para apresentação na superfície.
Adicione células dendríticas diretamente no poço de teste e na inserção no poço de controle negativo.
Adicione meios aos poços e incuba.
No poço de teste, as células interagem para formar uma sinapse imunológica, facilitando a transferência bacteriana da célula dendrítica para a célula T, um processo conhecido como transinfecção.
No poço de controle negativo, a barreira de membrana impede a interação célula-célula, inibindo assim a transinfecção.
Adicione o antibiótico gentamicina aos poços e incuba.
A gentamicina não pode penetrar nas células eucarióticas, matando apenas bactérias não internalizadas, enquanto as bactérias internalizadas sobrevivem.
A amostra de teste contendo células T infectadas e a amostra de controle com células T não infectadas estão agora prontas para isolamento de células T e quantificação de transinfecção.
Em uma placa de cultura de 24 poços, adicione dois milhões de
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