Avaliação da ligação pneumocócica a células endoteliais humanas primárias sob fluxo constante de meios

Coloque uma lâmina de canal revestida de gelatina, conectada a uma bomba microfluídica, em um microscópio stage.

A lâmina contém células endoteliais humanas primárias cultivadas sob meio fluido, com cadeias de fator de von Willebrand ou VWF, uma glicoproteína, na superfície da célula.

Essas cordas são geradas estimulando as células com histamina.

O fluxo de meio controlado, aplicado através da bomba microfluídica, promove a secreção e o desenrolamento do FVW. Isso expõe domínios de associação específicos nas cadeias de caracteres VWF.

Pare o fluxo de meio, adicione um anticorpo específico para FVW conjugado com fluoróforo verde e retome o fluxo para rotular as cadeias com o anticorpo.

Pause o fluxo de mídia e introduza bactérias pneumococos vermelhas que expressam proteínas fluorescentes.

Reinicie o fluxo para distribuir as bactérias, permitindo a fixação aos domínios expostos por meio de adesinas superficiais.

Usando microscopia de fluorescência, visualize a ligação bacteriana em tempo real às cordas.

Pare o fluxo de mídia e adquira imagens de pilha Z para quantificar a ligação bacteriana às células endoteliais.

Para visualização microscópica, coloque a unidade fluídica na câmara de aqueci