Análise in vivo de infecções bacterianas associadas a implantes usando embriões de peixe-zebra

Comece com um prato contendo uma câmara de agarose moldada com ranhuras.

Cada sulco contém embriões de peixe-zebra anestesiados submersos em um meio embrionário suplementado com um agente anestésico.

Sob um microscópio óptico, insira uma agulha de microinjeção no tecido muscular.

Injete uma suspensão contendo S. aureus e microesferas de poliestireno para modelar uma infecção associada ao implante.

Transfira os embriões injetados para poços individuais de uma placa de vários poços preenchida com um meio fresco e incuba.

As microesferas oferecem uma superfície física que suporta a colonização bacteriana e promove a infecção.

Para avaliar a infecção bacteriana associada ao implante, transfira cada embrião para um tubo separado e lave-o com um tampão. Adicione tampão e contas de cerâmica.

Homogeneizar para lisar os embriões e liberar conteúdo interno, incluindo bactérias.

Coloque os homogeneizados diluídos em placas e incube para permitir a formação de colônias.

Os embriões injetados com a suspensão microesfera-bactéria apresentam contagens de colônias mais altas do que aqueles injetados apenas com a suspensão bacteriana. Isso indica que as microesferas aumentam a suscetibilidade à infecção.

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