Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:48 min. • September 26th, 2025
Pegue uma cubeta contendo uma solução de trabalho de tioflavina T, um corante fluorescente específico para amilóide, dissolvido em solução salina tamponada com fosfato.
Colocar a cubeta num espectrofluorómetro e registar o sinal de fluorescência da linha de base.
Pause a varredura e remova a cubeta.
Adicione o sobrenadante de cultura esterilizado por filtro coletado de células endoteliais pulmonares infectadas com bactérias virulentas Pseudomonas .
O sobrenadante contém agregados amilóides, que são proteínas ricas em folhas beta mal dobradas.
Misture suavemente o conteúdo por inversão para garantir uma distribuição uniforme.
Recarregue a cubeta no espectrofluorômetro e retome a varredura para adquirir um sinal de fluorescência baseado no tempo.
A tioflavina T liga-se especificamente a amiloides ricos em folhas beta, o que leva a uma fluorescência aumentada.
Execute uma varredura de fluorescência usando as mesmas configurações.
Um aumento na fluorescência em relação à linha de base indica a presença e a abundância relativa de amiloides induzidos por infecção no sobrenadante da cultura.
Para quantificar os amilóides dentro do sobrenadante, adicione 20 microlitros de solução estoque de tioflavi
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