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Microbiologia
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Comece com um frasco contendo uma mola e cheio de um meio rico em nutrientes que suporte o ciclo de vida completo da bactéria Streptomyces venezuelae .
Inocule os esporos bacterianos no meio e incube com agitação para garantir a aeração adequada e a distribuição de nutrientes.
A mola melhora a mistura, apoiando um crescimento uniforme e consistente.
Os esporos absorvem nutrientes e germinam, produzindo tubos germinativos que se estendem em suas pontas, ramificam-se em hifas e se desenvolvem em uma estrutura micelial.
À medida que os nutrientes se tornam limitados, o organismo produz hifas esporogênicas especiais que se dividem e produzem esporos, células reprodutivas dormentes.
Observe sob um microscópio de contraste de fase para confirmar a presença de fragmentos miceliais e esporos.
Centrifugue a cultura para pellet os detritos miceliais mais pesados, deixando esporos mais leves no sobrenadante.
Transfira o sobrenadante para um microtubo e coloque-o no gelo para evitar a germinação prematura.
Diluir a suspensão de esporos em meio fresco e armazená-la em condições frias até nova utilização.
Inocular 30 mililitros de meio de crescimento suplementado com 10 microlitros de esporos da cepa S.venezuela a ser fotografada. Para um crescimento consistente e esporulação das células, use um frasco defletor ou um frasco que contenha uma mola para permitir aeração suficiente.
Cultive as células por 35 a 40 horas a 30 graus Celsius e 250 RPM. Quando estiver pronto, você poderá ver os fragmentos miceliais e esporos por meio de microscopia de contraste de fase montada em líquido. Centrifugue um mililitro da cultura em uma centrífuga de mesa a 400 vezes G por um minuto para granular o micélio e os fragmentos de células maiores.
Em seguida, transfira aproximadamente 300 microlitros do sobrenadante contendo uma suspensão de esporos para um novo tubo de 1,5 milímetro e coloque o tubo no gelo.