Imagem de lapso de tempo de fluorescência do ciclo de vida de Streptomyces venezuelae

Pegue uma placa microfluídica com um poço contendo esporos de Streptomyces venezuelae, uma bactéria formadora de hifas.

Outros poços designados contêm meio rico em nutrientes ou gasto.

Os esporos são derivados de uma cepa que expressa proteínas fluorescentes DivIVA e FtsZ, que se localizam nas pontas das hifas e nas paredes transversais, respectivamente.

Aplique óleo de imersão na lente objetiva de um microscópio invertido e na janela de imagem da placa.

Monte a placa no microscópio stage e comece a imagem de lapso de tempo.

Carregue os esporos na câmara de cultura da placa.

Em seguida, introduza o meio rico em nutrientes para iniciar a germinação dos esporos.

À medida que as hifas crescem, DivIVA se acumula nas pontas das hifas, enquanto FtsZ forma anéis dispersos nas paredes transversais.

Em seguida, mude para a mídia gasta. A falta de nutrientes neste meio suporta a esporulação.

Nas hifas brotadas, os focos de DivIVA desaparecem e o FtsZ se reorganiza em uma escada regular de anéis de divisão, formando septos de esporulação.

Com o tempo, o desaparecimento da fluorescência FtsZ nas mesmas hifas confirma a conclusão da esporulação.

Pré-aqueça a câmara ambiental a 30 graus Celsius com anteced