JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 vistas • 2:47 min • September 26th, 2025
Pegue uma placa de ágar de enxame que suporta a motilidade de enxame - um movimento bacteriano coordenado através de uma superfície semissólida que forma padrões semelhantes a gavinhas.
Inocule o centro da placa com uma cultura de Pseudomonas aeruginosa e coloque uma mistura da mesma cultura com um antibiótico em posições satélites uniformemente espaçadas.
Cubra o prato com uma tampa pintada de preto para minimizar os reflexos da luz.
Coloque a placa em um scanner de mesa dentro de uma incubadora mantida com umidade ideal.
Durante a incubação, a população central começa a se multiplicar e enxamear.
À medida que o enxame se aproxima das colônias tratadas com antibióticos, ele detecta sinais de estresse secretados pelas bactérias e redireciona para evitar essas regiões.
O scanner, controlado por software automatizado, captura imagens de alta resolução em intervalos regulares.
Compile essas imagens em um vídeo para visualizar a progressão e a evitação do enxame ao longo do tempo.
Quantifique a evitação de enxames medindo a distância de cada colônia satélite até a borda do enxame central em uma imagem de estágio final.
Depois de colocar as placas no scanner, abra o arquivo e salve as configurações para definir o caminho de salvamento das imagens e clique em digitalizar e OK em intervalos de 30 minutos. Para automatizar a aquisição de imagens, use o software de script.
Selecione a verificação ociosa e a verificação única e clique com o botão direito do mouse na verificação ociosa e, em seguida, clique com o botão esquerdo em ativado. No final da incubação, importe todas as imagens digitalizadas para o ImageJ. Na janela de opções de sequência, o número de imagens indicará o número de imagens selecionadas.
Mantenha a imagem inicial em uma para começar a partir da primeira imagem na pasta e as imagens em escala em 100% para conservar o tamanho original das imagens. Clique em converter para RGB para manter as imagens coloridas. Deixe usar pilha virtual desmarcada e clique em OK para carregar as imagens.
Clique em arquivo, salvar como e AVI para mesclar as imagens em um arquivo AVI. Ajuste a compactação para JPEG e a taxa de quadros para cinco quadros por segundo. Em seguida, salve o lapso de tempo AVI na pasta de armazenamento apropriada.