Indução da diferenciação de Vibrio parahaemolyticus em células de enxame

0 vistas3:55 min • September 26th, 2025

Comece com um meio de ágar fundido que suporte o crescimento bacteriano.


Adicione um quelante de ferro para esgotar o ferro livre e complemente o meio com cálcio.


Despeje o meio em um prato, deixe-o solidificar e seque-o para eliminar a umidade residual.


Pegue uma cultura de caldo de Vibrio parahaemolyticus, uma bactéria flagelada.


Em meios líquidos, a bactéria existe em uma forma de nadador curto em forma de bastonete com um flagelo.


Coloque a cultura no prato e deixe-a secar para promover o contato bacteriano com a superfície.


Feche o prato e incuba, permitindo que subprodutos metabólicos voláteis das bactérias se acumulem.


O contato com a superfície, a limitação de ferro, a disponibilidade de cálcio e os subprodutos acumulados induzem a expressão gênica, que desencadeia a diferenciação em células de enxame alongadas contendo flagelos laterais, permitindo o movimento em superfícies sólidas.


As células do enxame se expandem para fora e formam erupções de enxame compostas por células totalmente diferenciadas, indicando diferenciação bem-sucedida.


Para preparar a solução de ágar para fazer placas de enxame, suspenda quatro gramas de infusão de coração, ou pó de ágar HI e 100 mililitros de água bidestilada


Ferva cuidadosamente a solução de ágar H. I. em um forno de micro-ondas, agitando o frasco de vez em quando até que o pó se dissolva. Autoclave a solução de ágar a 121 graus Celsius por 20 minutos, resfrie a solução de ágar a 60 a 65 graus Celsius com agitação constante. O próximo passo envolve o manuseio de 2,2'-Bipiridil, que é altamente tóxico, portanto, luvas e óculos de segurança devem ser usados.


Adicionar 2,2'-bipiridil a uma concentração final de 50 micromolares. Adicionar cloreto de cálcio a uma concentração final de quatro milimolares. Inocule uma pequena quantidade de células de V. parahaemolyticus da borda de uma única colônia em 5 mililitros de caldo LB.


Incubar a cultura a 37 graus Celsius em uma incubadora agitadora até atingir uma densidade óptica de 600 nanômetros de 0,8. Isso geralmente leva cerca de duas a três horas. Enquanto a cultura de células está crescendo, pipete 30 a 35 mililitros da solução final de ágar HI em uma placa de Petri redonda de 150 milímetros e deixe o ágar solidificar.


Imediatamente antes de detectar a cultura de células, seque a placa de ágar na vertical com a tampa aberta a 37 graus Celsius por pelo menos 10 minutos ou até que quaisquer resíduos líquidos tenham desaparecido, mas não mais. Localize um microlitro de cultura de células no centro da placa de enxame de ágar HI e deixe o local secar. Sele a placa com fita plástica transparente, tomando cuidado para evitar a formação de bolhas de ar e dobras na fita.


Incube a placa a 24 graus Celsius durante a noite. Isso resultará na formação de uma colônia de enxame de V. parahaemolyticus com chamas de enxame que se estendem do centro da colônia, como mostrado neste videoclipe de lapso de tempo.
 

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Última atualização: 29 agosto 2026