Isolamento de colônias bacterianas direcionadas usando degradação de hidrogel com padrão de luz

0 views • 3:07 min • September 26th, 2025

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Pegue uma lamínula com uma camada de hidrogel fotodegradável que contém colônias bacterianas aprisionadas, geneticamente modificadas para emitir fluorescência.

Coloque a lamínula em um suporte.

Adicione meios para evitar a desidratação da amostra.

Sob um microscópio de campo claro, concentre-se em uma única colônia de interesse.

Usando o software apropriado, projete um padrão de luz para extração de células na periferia da colônia para quebrar as ligações estruturais do hidrogel e minimizar a exposição UV às células.

Ajuste a intensidade da luz UV e a duração da exposição.

Inicie a exposição à luz UV para quebrar as ligações estruturais no hidrogel nas áreas expostas que facilitam a liberação da colônia alvo.

Usando um filtro de fluorescência, identifique a colônia.

Coloque uma ponta de tubo no local, com a outra extremidade conectada a uma seringa.

Mude para o modo de campo claro e, usando a seringa, aspire a colônia liberada.

Transfira a colônia para um tubo para análise posterior.

Coloque a amostra em um suporte PDMS e adicione o meio definido em cima da amostra para evitar a desidratação da amostra e fornecer uma solução transportadora para as células liberadas. Depois de colocar o espelho de calibração na posição, ajuste o foco do microscópio para obter uma imagem nítida das colônias dentro do hidrogel ou da matriz de micropoços e inspecione para identificar colônias ou poços de interesse.

Aqui, projete os padrões de luz enquanto a visualização da câmera mostra as colônias dentro da amostra para testar diferentes padrões para extração de células e salvar o padrão definido. Em seguida, selecione a seção de controle de sessão, adicione a sequência salva na guia intitulada com o nome do produto da ferramenta de iluminação padronizada. Escolha a opção para estimular o padrão para visualizar e ajustar o local de exposição desejado.

Em seguida, ajuste a intensidade da luz para 60% e o tempo de exposição para 40 segundos na guia de controle do LED e inicie o processo de exposição. Monitore a degradação do hidrogel em tempo real e no modo Campo Claro para garantir a liberação da célula. Para coletar a célula liberada, mude o filtro do microscópio de Brightfield para TRITC para visualizar a área exposta da amostra a olho nu.

Uma vez localizada a área exposta, coloque a extremidade do tubo sobre o ponto irradiado e, em seguida, troque o filtro do microscópio de volta para Campo claro para monitorar a recuperação da célula em tempo real. Use a seringa presa à outra extremidade do tubo para retirar cuidadosamente 200 microlitros de solução contendo as células liberadas e transferir a solução para um tubo de centrífuga de 1,5 milímetro para análise de DNA ou plaqueamento

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Formação Light-mediada e padronização de hidrogéis para aplicações de cultura celular

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Last updated: 18 July 2026