$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Pegue uma lamínula com uma camada de hidrogel fotodegradável que contém colônias bacterianas aprisionadas, geneticamente modificadas para emitir fluorescência.
Coloque a lamínula em um suporte.
Adicione meios para evitar a desidratação da amostra.
Sob um microscópio de campo claro, concentre-se em uma única colônia de interesse.
Usando o software apropriado, projete um padrão de luz para extração de células na periferia da colônia para quebrar as ligações estruturais do hidrogel e minimizar a exposição UV às células.
Ajuste a intensidade da luz UV e a duração da exposição.
Inicie a exposição à luz UV para quebrar as ligações estruturais no hidrogel nas áreas expostas que facilitam a liberação da colônia alvo.
Usando um filtro de fluorescência, identifique a colônia.
Coloque uma ponta de tubo no local, com a outra extremidade conectada a uma seringa.
Mude para o modo de campo claro e, usando a seringa, aspire a colônia liberada.
Transfira a colônia para um tubo para análise posterior.
Coloque a amostra em um suporte PDMS e adicione o meio definido em cima da amostra para evitar a desidratação da amostra e fornecer uma solução transportadora para as células liberadas. Depois de colocar o espelho de calibração na posição, ajuste o foco do microscópio para obter uma imagem nítida das colônias dentro do hidrogel ou da matriz de micropoços e inspecione para identificar colônias ou poços de interesse.
Aqui, projete os padrões de luz enquanto a visualização da câmera mostra as colônias dentro da amostra para testar diferentes padrões para extração de células e salvar o padrão definido. Em seguida, selecione a seção de controle de sessão, adicione a sequência salva na guia intitulada com o nome do produto da ferramenta de iluminação padronizada. Escolha a opção para estimular o padrão para visualizar e ajustar o local de exposição desejado.
Em seguida, ajuste a intensidade da luz para 60% e o tempo de exposição para 40 segundos na guia de controle do LED e inicie o processo de exposição. Monitore a degradação do hidrogel em tempo real e no modo Campo Claro para garantir a liberação da célula. Para coletar a célula liberada, mude o filtro do microscópio de Brightfield para TRITC para visualizar a área exposta da amostra a olho nu.
Uma vez localizada a área exposta, coloque a extremidade do tubo sobre o ponto irradiado e, em seguida, troque o filtro do microscópio de volta para Campo claro para monitorar a recuperação da célula em tempo real. Use a seringa presa à outra extremidade do tubo para retirar cuidadosamente 200 microlitros de solução contendo as células liberadas e transferir a solução para um tubo de centrífuga de 1,5 milímetro para análise de DNA ou plaqueamento