JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 vistas • 2:58 min • September 26th, 2025
Pegue um camundongo fêmea tratado com um hormônio que condiciona o ambiente vaginal, aumentando sua suscetibilidade à infecção.
Levante o rato pela cauda enquanto ele segura a gaiola com as patas dianteiras para elevar os quartos traseiros e expor a abertura vaginal.
Enxágue o lúmen vaginal com um tampão anaeróbico para eliminar o muco, uma barreira protetora contra patógenos, juntamente com células epiteliais mortas e micróbios vaginais endógenos.
Inocule imediatamente a vagina com uma suspensão de um patógeno bacteriano anaeróbico, mantendo o camundongo contido para minimizar a perda de líquidos.
Para co-inoculação, administrar uma suspensão de outro agente patogénico bacteriano anaeróbio utilizando o mesmo volume de antes.
Aloje o camundongo inoculado separadamente dos camundongos não inoculados para evitar a contaminação cruzada.
Após a inoculação, a bactéria adere ao epitélio vaginal, cresce em colônias e desenvolve uma camada protetora de biofilme que atua como uma barreira contra as respostas imunes do hospedeiro.
Prepare os tubos de lavagem vaginal na câmara anaeróbica pipetando 70 microlitros de PBS anaeróbico estéril em tubos de microcentrífuga de 1,5 mililitro marcados com números de camundongos.
Feche bem os tubos e retire-os da câmara. Para realizar a lavagem vaginal, primeiro, coloque um rato em cima de uma gaiola que ele possa agarrar com as patas dianteiras. Em seguida, segure suavemente a parte central da cauda e levante-a de modo que os quartos traseiros fiquem ligeiramente elevados e a abertura vaginal fique exposta.
Depois de retirar 50 microlitros de PBS do tubo de lavagem rotulado, insira suavemente a ponta da pipeta de dois a três milímetros no lúmen vaginal para lavá-la com PBS, pipetando para dentro e para fora três a quatro vezes. Em seguida, transfira o material de lavagem de volta para o tubo de lavagem original com os 20 microlitros restantes de PBS não utilizado. Imediatamente após esta lavagem vaginal, inocular cada camundongo transferindo vaginalmente 20 microlitros da suspensão bacteriana ou controle do veículo.
Para experimentos de co-inoculação com duas cepas bacterianas diferentes, inocule separadamente com 10 microlitros de cada suspensão bacteriana, em vez de misturar as cepas previamente. Para evitar que o volume administrado se acumule imediatamente no intróito vaginal, continue segurando a parte traseira do camundongo por 10 a 20 segundos. Transfira o camundongo inoculado para uma nova gaiola ou com companheiros de gaiola já inoculados e repita o procedimento com os outros camundongos.