Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:30 min. • September 26th, 2025
Para rastrear a resistência bacteriana em diferentes cepas de tomate, comece com mudas de tomate de 10 dias cultivadas em condições estéreis.
Essas mudas exibem folhas verdadeiras emergentes e raízes estabelecidas.
Inunde ambas as cepas com bactérias patogênicas misturadas com um surfactante para facilitar a disseminação uniforme do inóculo na superfície da planta. Incline e agite a placa para maximizar o contato da muda com o inóculo.
Remova o excesso de inóculo, feche novamente as placas e incube-as em uma câmara de crescimento.
A bactéria entra pelos estômatos e coloniza o apoplasto, o espaço extracelular entre as células das folhas.
As bactérias injetam proteínas efetoras nas células vegetais para suprimir as respostas imunes das plantas.
As cepas suscetíveis não conseguem detectar esses efetores, permitindo a proliferação bacteriana e danos ao tecido vegetal induzidos por toxinas bacterianas.
As cepas resistentes reconhecem os efetores e produzem espécies reativas de oxigênio para matar as bactérias.
Pós-incubação, cepas resistentes mostram crescimento sustentado, enquanto cepas suscetíveis exibem desenvolvimento interrompido.
Transfira as placas com as mudas de dez dias da câmara de crescimento para o gabinete de biossegurança e remova a fita cirúrgica. Em seguida, transfira seis mililitros de inóculo para cada placa.
Empurre suavemente as mudas para dentro do inóculo com uma ponta de pipeta e inicie um cronômetro por três minutos. Segure uma placa em cada mão e incline a frente da placa para baixo para submergir os cotilédones e as folhas das mudas. Agite o inóculo de um lado para o outro cinco a sete vezes e, em seguida, incline as placas para trás para cobrir as raízes com o inóculo.
Incline as placas para baixo novamente e repita o ciclo por um total de três minutos. Despeje o inóculo das placas, coloque-as em uma superfície plana e despeje qualquer inóculo residual pela segunda vez. Embrulhe novamente as placas e coloque-as de volta na câmara de crescimento.