Entrega localizada de bactérias no lúmen intestinal de uma larva de peixe-zebra usando microinjeção

Pegue um prato contendo uma larva de peixe-zebra anestesiada.

Aplique uma gota de agarose de baixo ponto de fusão sobre a larva e posicione-a suavemente lateralmente para permitir o acesso intestinal durante a injeção.

Agora, resfrie brevemente o agarose para solidificá-lo, imobilizando assim a larva.

Adicione meios contendo um agente anestésico para manter a larva sob anestesia.

Em seguida, tome uma suspensão de Clostridioides difficile marcada com fluorescência, uma bactéria patogênica, e adicione um corante traçador para facilitar o monitoramento da injeção.

Carregue esta mistura em uma agulha de microinjeção e monte a agulha em um micromanipulador.

Sob um estereomicroscópio, posicione a agulha em um ângulo direcionado para o intestino larval.

Em seguida, insira suavemente a ponta da agulha no lúmen intestinal.

Injete as bactérias diretamente no lúmen e confirme a entrega bem-sucedida usando o corante traçador. Em seguida, retraia a agulha.

Usando microscopia de fluorescência, confirme a localização de Clostridioides difficile no intestino larval.

Primeiro, coloque uma gota de agarose de baixo ponto de fusão a 0,8% nas larvas do peixe-zebra em uma placa de Petri para cobrir. Ajuste suavem