Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:28 min. • September 26th, 2025
Comece com uma larva de peixe-zebra sacrificada com um intestino infectado por Clostridioides difficile, uma bactéria anaeróbica patogênica.
Prenda o tronco dorsal superior da larva e remova sua cabeça para expor os órgãos internos.
Prenda o tronco dorsal médio e isole suavemente o intestino da cavidade corporal.
Transfira o intestino isolado para um tubo de microcentrífuga contendo tampão.
Homogeneizar o intestino usando um pilão para romper o tecido e liberar os micróbios intestinais.
Transferir o homogeneizado para um tubo contendo meios de criação selectiva suplementados com antibióticos.
Incubar o homogeneizado numa câmara anaeróbia.
As condições anaeróbicas inibem o crescimento de bactérias aeróbicas, enquanto os antibióticos visam e suprimem especificamente o crescimento de micróbios intestinais anaeróbicos nativos.
Clostridioides difficile resiste a esses antibióticos e prolifera em condições anaeróbicas.
Os nutrientes e fatores de crescimento nos meios de criação promovem ainda mais a divisão celular, permitindo o crescimento de Clostridioides difficile viáveis.
Depois de sacrificar as larvas de peixe-zebra infectadas, insira uma agulha no tronco dorsal das larvas de peixe-zebra perto da cabeça para imobilizar o peixe-zebra. Remova a cabeça atrás das guelras com uma lanceta.
Insira uma segunda agulha no meio do tronco dorsal. Insira uma terceira agulha no abdômen do peixe-zebra e puxe o intestino para fora da cavidade corporal. Use uma agulha de microinjeção para transferir 10 a 15 intestinos para um tubo de 1,5 mililitro contendo 200 microlitros de PBS 1X estéril.
Homogeneizar os intestinos com um pilão para romper o tecido e preparar homogeneizados. Certifique-se de que o pilão atinja o fundo do tubo para interromper completamente todos os intestinos. Adicionar aos homogeneizados o meio de criação de Clostridioides difficile contendo D-cicloserina e cefoxitina, com ou sem taurocolato, e incubar numa câmara anaeróbia.