JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 vistas • 2:45 min • September 26th, 2025
Pegue chips microfluídicos com câmaras de crescimento e drogas separadas por uma válvula micromecânica.
Carregue cepas mutantes de E. coli do tipo selvagem e resistentes ao TMP, suspensas em meio, nas câmaras de crescimento usando pressão, onde o Trimetoprim (TMP) é o antibiótico testado.
Em seguida, carregue as câmaras de drogas com meios contendo uma baixa concentração de TMP para induzir estresse celular nas bactérias.
Acione a válvula micromecânica para permitir a difusão do TMP nas câmaras de crescimento, permitindo a entrada do TMP nas bactérias.
Coloque os chips dentro da incubadora montada no microscópio invertido stage e inicie a imagem de lapso de tempo.
Em E. coli do tipo selvagem, o TMP se liga à enzima diidrofolato redutase, impedindo a ligação do diidrofolato e causando filamentação induzida por estresse e redução da multiplicação bacteriana.
No entanto, a estrutura DHFR alterada da cepa mutante impede a ligação do TMP, permitindo a multiplicação normal.
Observe as imagens de lapso de tempo.
E . coli do tipo selvagem exibe filamentação e multiplicação reduzida sob tratamento com TMP, enquanto a cepa mutante exibe morfologia e multiplicação normais, indicando resistência a antibióticos.
Depois de descongelar a amostra congelada diariamente à temperatura ambiente por cinco minutos, inocular um novo tubo de ensaio com meio M9 fresco.
Coloque a amostra em uma incubadora agitada a 37 graus Celsius durante a noite. No dia seguinte, use o meio M9 para diluir a amostra microbiana dez vezes e carregue-a no dispositivo microfluídico pressionando o recipiente de amostra microbiana a cinco PSI. Em seguida, carregue o meio contendo TMP no chip pressionando o M9 com o recipiente TMP a cinco PSI.
Execute a mistura entre o micróbio e o medicamento acionando a válvula micromecânica entre as duas câmaras no chip microfluídico por 15 minutos. Por fim, coloque o chip microfluídico na incubadora do microscópio montada no microscópio invertido. Com uma câmera CCD, adquira imagens de células na câmara de crescimento a cada hora durante oito horas.
Calcule os dados do número de células de acordo com o protocolo de texto.