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Microbiologia
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Comece com uma cultura líquida de Sporosarcina pasteurii em um meio rico em nutrientes.
Tome uma solução de estoque de enriquecimento contendo uréia, cloreto de cálcio, cloreto de amônio e bicarbonato de sódio.
Adicione uma porção do meio de enriquecimento ao tubo de cultura bacteriana.
Vortex os tubos para misturar as células bacterianas e nutrientes uniformemente.
Incube as culturas enriquecidas em uma incubadora sem vibração.
Sporosarcina pasteurii, uma bactéria Gram-positiva do solo, produz a enzima urease na presença de uréia.
A urease decompõe a uréia em íons de amônio e carbonato.
O cloreto de amônio e o bicarbonato de sódio ajudam a manter um pH alcalino que suporta a precipitação mineral.
Os íons de carbonato reagem com os íons de cálcio do cloreto de cálcio para formar carbonato de cálcio insolúvel.
Este precipitado começa a se formar ao redor das células bacterianas e cristaliza em calcita, uma forma de cristal estável.
Esses cristais se depositam como depósitos brancos no fundo do tubo, demonstrando precipitação de calcita induzida microbiologicamente, ou MICP.
Transfira nove mililitros da cultura líquida preparada para vários tubos de centrífuga esterilizados de dez mililitros. Prepare 100 mililitros da solução estoque de enriquecimento externo usando uma balança analítica para medir cuidadosamente dois gramas por litro de uréia, um grama por litro de cloreto de amônio, 212 miligramas por litro de bicarbonato de sódio e 280 miligramas por litro de cloreto de cálcio.
Em um copo com meio fresco, misture todos os ingredientes, exceto a uréia, e a autoclave. Após a autoclavagem, misturar a ureia com um mililitro de meio fresco e passar a solução através de uma seringa equipada com um filtro de 0,2 micrómetros antes de adicionar ao meio de enriquecimento. Adicionar um mililitro do meio de enriquecimento com aditivos aos tubos de centrifugação esterilizados contendo nove mililitros da cultura preparada.
Vortex cada tubo e incube em uma incubadora sem vibração a 30 graus Celsius. Monitore todas as unidades regularmente para o início da precipitação.