Identificação de alto rendimento de polímeros repelentes de bactérias por meio de triagem de microarray

Coloque uma lâmina de microarray esterilizada e revestida de agarose com vários pontos de polímero em uma placa multipoços. A agarose minimiza a ligação bacteriana inespecífica.

Adicione uma cultura bacteriana mista à lâmina e incube-a com agitação suave.

As bactérias secretam proteínas de adesão distintas que se ligam a pontos de polímero favoráveis, resultando em uma ligação bacteriana mais forte e colonização ao longo do tempo.

Por outro lado, os polímeros repelentes resistem à adsorção de proteínas e reduzem a fixação bacteriana.

Enxágue a lâmina com solução salina tamponada com fosfato ou PBS para remover bactérias fracamente ligadas.

Adicione DAPI para corar o DNA de bactérias ligadas à superfície.

Lave a lâmina com PBS, seque-a e sele-a com uma lamínula adesiva.

Esterilize a superfície externa da lâmina com etanol.

Capture imagens de campo claro para localizar os pontos de polímero. Em seguida, mude para o modo de fluorescência para detectar a fluorescência nos pontos de polímero.

Manchas de polímero que exibem fluorescência reduzida indicam ligação bacteriana mínima e são identificadas como polímeros repelentes de bactérias.

Após a cultura e preparação do inóculo para os microarrays, de acordo com o protocolo de texto, coloque os microarrays de polímero esterilizado UV em placas retangulares de quatro poços e adicione seis mililitros de culturas bacterianas mistas. Incubar as placas a 37 graus Celsius com agitação suave durante cinco dias. Após a incubação, use PBS para enxaguar suavemente os microarrays duas vezes.

Em seguida, adicione um micrograma por mililitro de DAPI em PBS e incube por 30 minutos. Em seguida, transfira os microarrays para uma nova placa de quatro poços, cubra os microarrays com PBS e gire suavemente. Em seguida, troque o PBS uma vez e repita a lavagem.

Após o enxágue, seque os microarrays sob um fluxo de ar, aplique o filme de vedação e afixe as lamínulas de vidro nas lâminas do microarray. Quando a cola estiver seca, use etanol a 70% para esterilizar a superfície externa. Usando um microscópio de fluorescência, equipado com um subjetivo de 20x, capture imagens únicas para cada ponto de polímero em canais de campo claro e DAPI.