Preparação de inóculo de Escherichia coli enterohemorrágica bioluminescente

Comece com um estoque congelado de Escherichia coli enterohemorrágica ou EHEC, uma bactéria intestinal patogênica.

Essas bactérias carregam um plasmídeo que expressa luciferase para imagens bioluminescentes em tempo real e um gene de resistência a antibióticos para seleção.

Listre as bactérias em uma placa de ágar contendo o antibiótico apropriado e incube para isolar colônias individuais contendo plasmídeos.

Escolha uma única colônia e cultive-a em caldo suplementado com antibióticos. Incubar para propagar uma população geneticamente uniforme e estável ao plasmídeo.

Expanda a cultura sob condições aeradas para sincronizar as células em crescimento logarítmico.

Monitore o crescimento bacteriano até que a densidade óptica desejada seja atingida.

Em seguida, centrifugue a cultura para pellet as bactérias.

Remova o sobrenadante e lave o pellet com solução salina estéril.

Centrifugue novamente. Descarte o sobrenadante e ressuspenda o pellet em um volume menor de solução salina.

Esta suspensão concentrada de EHEC está agora pronta para rastreamento baseado em bioluminescência.

Para começar, coloque um estoque negativo de 80 graus Celsius de bactérias E.coli O157 H7 EDL933 que abriga um plasmídeo