Isolamento de bactérias resistentes a antibióticos de uma amostra de água para análise molecular

0 views • 3:16 min • September 26th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Comece com uma amostra de água que contenha bactérias transmitidas pela água e filtre-a para remover os detritos.

Transfira o filtrado diluído para placas de ágar com baixo teor de nutrientes, cada uma suplementada com um antibiótico específico. Espalhe o filtrado e incuba.

As bactérias portadoras de um gene específico de resistência a antibióticos crescem nas placas antibióticas correspondentes e formam colônias.

Conte as colônias para determinar as unidades formadoras de colônias (UFCs), representando o número de bactérias resistentes a antibióticos.

Selecione uma única colônia de cada placa e suspenda-a em água destilada estéril.

Aqueça a suspensão para lisar as células e liberar o conteúdo intracelular, incluindo o DNA bacteriano que contém o gene de resistência a antibióticos.

Centrifugue os tubos para separar os detritos e recolher o sobrenadante que contém o ADN.

Adicione reagentes de amplificação ao DNA extraído.

Coloque os tubos em um termociclador e execute o programa para amplificar uma região específica do DNA bacteriano.

O DNA amplificado está pronto para análise de sequência para identificar o gene de resistência a antibióticos.

Processe a amostra de água assepticamente, filtrando-a através de um pano de musselina estéril para remover qualquer partícula. Em seguida, dilua em série a amostra de água filtrada para análise posterior. Para determinar a contagem bacteriana resistente a antibióticos, adicione os antibióticos separadamente em tubos contendo 20 mililitros de ágar R2A fundido estéril modificado aproximadamente a 40 graus Celsius.

Agite para misturar uniformemente e despeje em placas de Petri estéreis antes que o ágar solidifique. Espalhe 100 microlitros de suspensão bacteriana em suas respectivas placas modificadas com ágar R2A contendo antibióticos. Incube as placas a 35 a 37 graus Celsius por 48 horas e, em seguida, determine a contagem bacteriana.

Para preparar o molde de DNA dos isolados para PCR, usando um palito de dente estéril, pegue uma única colônia pura isolada do isolado crescendo em uma placa de Petri. Suspenda a colônia bacteriana em 100 microlitros de água destilada dupla estéril em um tubo de microcentrífuga e ferva-a em banho-maria fervente ou banho seco por 10 minutos a 100 graus Celsius. Centrifugue a suspensão a 10.000 g por dois minutos para pellet os detritos e transfira o sobrenadante para um tubo de microcentrífuga estéril fresco para usar como molde de DNA bruto.

Para amplificar a região V3 do gene 16S rRNA por PCR, prepare 40 microlitros da mistura de reação em um tubo de PCR. Coloque o tubo no bloco térmico e execute o programa apropriado no termociclador de PCR.

08:04

O uso de um cartucho de filtro para Amostras de filtração de água e extração de DNA Ambiental

Related Videos

0 Views

08:23

Visualização da resistência bacteriana usando sondas de antibióticos fluorescentes

Related Videos

0 Views

12:32

Quantificação da resistência aos antibióticos mediada por plasmídeos em uma abordagem de evolução experimental

Related Videos

0 Views

08:30

Um dia-Esquema de fluxo de trabalho para detecção de patógenos de bactérias e de resistência antimicrobiana de hemoculturas

Related Videos

0 Views

03:46

Detecção da suscetibilidade a antibióticos bacterianos usando um microscópio de espalhamento Raman estimulado

Related Videos

0 Views

14:04

Biossensor para detecção de bactérias Staphylococcus resistente a antibióticos

Related Videos

0 Views

08:33

Polimerase quantitativos baseados na reação em cadeia análises de murino Microbiota Intestinal após o tratamento antibiótico Oral

Related Videos

0 Views

10:03

Isolamento, Propagação e Identificação de Espécies Bacterianas com Propriedades Metabolizadoras de Hidrocarbonetos de Habitats Aquáticos

Related Videos

0 Views

07:20

Bioprospecção de microrganismos extreílicos para enfrentar a poluição ambiental

Related Videos

0 Views

08:58

Isolamento e Identificação de Bactérias Resistentes a Antibióticos Transmitidos pela Água e Caracterização Molecular de seus Genes de Resistência a Antibióticos

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026