Geração de protoplastos a partir da bactéria Gram-positiva Bacillus megaterium

Pegue uma cultura de Bacillus megaterium, uma bactéria gram-positiva.

Diluir a cultura em meio fresco e incubá-la com agitação para promover a divisão bacteriana.

Transfira a cultura para um tubo e centrifugue para pellet as bactérias.

Remova o sobrenadante e ressuspenda o pellet em meios contendo estabilizadores osmóticos para evitar a lise do protoplasto.

Transferir a solução ressuspensa para um balão, adicionar lisozima e incubar agitadamente.

Durante a incubação, a lisozima degrada a espessa parede celular do peptidoglicano da bactéria.

À medida que a parede celular se degrada, as bactérias mudam de uma forma em forma de bastonete para corpos esféricos delimitados apenas pela membrana plasmática, formando protoplastos.

Visualize a suspensão sob um microscópio.

As bactérias de formato redondo confirmam a formação de protoplastos, enquanto as bactérias inchadas em forma de bastonete indicam digestão incompleta.

Transfira a solução para um tubo e centrifugue para pellet os protoplastos.

Remova o sobrenadante e ressuspenda os protoplastos em meio fresco contendo estabilizadores osmóticos para análise posterior.

Para preparar protoplastos Gram-positivos de B. megaterium , dilua a cultura bacte