Preparação e Indução de Culturas de Borrelia burgdorferi para Produção de Partículas Virais

Comece com uma cultura de uma cepa geneticamente modificada de Borrelia burgdorferi, uma bactéria patogênica.

Esta cepa carrega DNA de bacteriófago dormente integrado em seu genoma, que foi projetado para incluir um gene alvo que confere resistência a antibióticos.

Adicione o antibiótico correspondente e incube a cultura. O gene de resistência a antibióticos expressa uma proteína que inibe o antibiótico, garantindo que apenas as bactérias que abrigam o gene proliferem.

Quando a cultura atingir a densidade desejada, centrifugue as células para pelletá-las e descarte o sobrenadante.

Ressuspenda o pellet, introduza um indutor químico e incube para induzir danos ao DNA.

A resposta de reparo do DNA resultante excisa o DNA do bacteriófago, iniciando sua replicação, expressão de proteínas estruturais e montagem de novos vírions portadores do gene de resistência a antibióticos.

Centrifugar novamente a cultura, rejeitar o sobrenadante e ressuspender as células num meio fresco.

As células bacterianas contendo vírions maduros estão prontas para outras aplicações a jusante.

Inocular 150 microlitros do clone apropriado de Borrelia burgdorferi em 15 mililitros de BSK em tubos de centrífuga cônicos estér