JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 vistas • 3:03 min • September 26th, 2025
Comece com culturas de cepas selvagens e mutantes de Streptomyces coelicolor, uma bactéria filamentosa do solo.
As cepas mutantes carregam mutações em genes de desenvolvimento que causam diferenças fenotípicas do tipo selvagem.
Recultive as colônias em placas frescas para minimizar o acúmulo de mutações espontâneas com a idade.
Listre colônias únicas das cepas em regiões separadas de uma placa em um padrão de cunha para evitar contaminação cruzada
Incube a placa para promover o crescimento bacteriano.
As cepas do tipo selvagem formam filamentos aéreos que se desenvolvem em longas cadeias de esporos pigmentados de cinza, dando às colônias uma aparência difusa.
Em contraste, as cepas mutantes não conseguem desenvolver filamentos aéreos, resultando em uma aparência careca, ou produzem menos esporos pigmentados, fazendo com que os filamentos aéreos pareçam brancos.
Coloque a placa de Petri em um fundo uniforme para visualizar a morfologia da colônia.
Capture imagens para comparar visualmente as diferenças fenotípicas entre as cepas selvagens e mutantes.
Use um método padrão, como o método de listras de quadrante demonstrado em Saunders 2012 para listrar cepas de Streptomyces em placas de ágar MS e cultura em colônias únicas.
A cada quatro a seis dias, escolha uma única colônia e coloque-a novamente em um prato novo. À medida que as colônias envelhecem, elas se tornam propensas a mutações aleatórias. Depois de realizar a mutagênese de acordo com o protocolo de texto, observe a morfologia da colônia para cada mutante em comparação com a cepa parental do tipo selvagem.
Ao caracterizar novas espécies de Streptomyces , compare o novo isolado com o de uma espécie bem estudada, observando a forma básica, superfície da colônia, opacidade, elevação e pigmentação. Rotule uma placa de ágar MS e listre cepas selvagens e mutantes em padrões de cunha. Tenha cuidado para que nenhuma cepa toque outra cepa para evitar contaminação cruzada.
Observe a data e a hora em que as cepas são riscadas na placa. Em seguida, incube as placas a 30 graus Celsius. Lembre-se, é extremamente importante sempre proteger sua amostra de Streptomyces da contaminação, use sua melhor técnica estéril para todas as etapas abrindo placas e tubos pelo menor tempo possível.
Coloque placas de Petri cultivadas em papel colorido ou branco para homogeneizar o fundo. Escreva no papel o nome da cepa, data, temperatura de incubação e tempo desde a primeira estria da placa.
Tire fotos digitais da placa com as informações de deformação escritas no fundo do papel para que a confusão seja mínima.