Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:35 min. • September 26th, 2025
Comece com uma lâmina de vidro com câmara revestida com uma membrana suportada composta de fosfolipídios, incluindo fosfolipídios biotinilados.
Incubar com neutravidina, que se liga à biotina na bicamada. Lave para remover o excesso de neutravidina.
Introduza um meio nutriente contendo vesículas gigantes ou GVs. Cada GV é uma vesícula esférica de bicamada lipídica do tamanho de mícrons que encapsula uma única célula bacteriana, servindo como modelo para estudar o comportamento celular individual em um ambiente confinado.
A neutravidina se liga aos lipídios GV biotinilados, prendendo as vesículas à membrana suportada para observação estável e de longo prazo sob condições estáticas.
Sele a câmara para manter a hidratação e minimizar a contaminação.
Coloque a lâmina em uma platina de microscópio equipada com uma plataforma de aquecimento para simular condições fisiológicas e observar sob um microscópio.
Os nutrientes do meio se difundem no GV para apoiar o crescimento bacteriano ao longo do tempo.
Essa configuração permite a visualização em tempo real do crescimento bacteriano de uma única célula em microambientes de vesículas confinadas.
Para imobilizar vesículas gigantes na membrana de suporte de duas camadas, introduza 10 microlitros de neutravidina em solução aquosa externa de vesícula gigante no orifício para uma incubação de 15 minutos à temperatura ambiente.
No final da incubação, lave suavemente o orifício duas vezes com 20 microlitros de meio LB, suplementado com glicose 200 milimolar, e adicione todo o volume da solução de vesícula gigante ao orifício da câmara. Em seguida, sele o orifício com uma lamínula de 18 por 18 milímetros. Para monitorar o crescimento bacteriano dentro das vesículas gigantes, selecione a objetiva 40X em um microscópio invertido e coloque a câmara no sistema de estágio de aquecimento do microscópio.
Em seguida, incube as vesículas gigantes contendo células bacterianas na câmara sob condições estáticas por seis horas a 37 graus Celsius, capturando e registrando imagens do crescimento da célula bacteriana a cada 30 minutos, com a câmera semicondutora de óxido metálico complementar científico.