Captação de DNA induzida por competência em Staphylococcus aureus

Faça uma cultura de S. aureus sensível ao antibiótico cloranfenicol.

Centrifugue para pellet a bactéria e remova o sobrenadante.

Transfira o pellet para um tubo contendo meios limitadores de nutrientes e incuba. O estresse nutricional aumenta a competência - a capacidade da bactéria de internalizar DNA estranho.

Centrifugue novamente e remova o sobrenadante. Ressuspenda o pellet em meio fresco limitante de nutrientes.

Em seguida, adicione DNA extraído de uma cepa de S. aureus carregando um gene resistente ao cloranfenicol. Incubar.

A maquinaria de captação de DNA processa o DNA em uma única fita e o transloca para o citoplasma, onde se integra ao cromossomo bacteriano.

Centrifugue e remova o sobrenadante. Ressuspenda o pellet em meios ricos em nutrientes.

Transferir a suspensão para um ágar fundido rico em nutrientes contendo cloranfenicol.

Despeje a mistura em um prato e incuba.

O crescimento de colônias resistentes ao cloranfenicol indica absorção bem-sucedida de DNA.

Cultive a célula receptora durante a noite, em cinco mililitros de TSB a 37 graus Celsius com agitação. Na manhã seguinte, transfira 0,5 mililitros da cultura noturna para um tubo de 1,5 mililitro.

Precipitar as células por ce