Análise microscópica do crescimento bacteriano sob estresse usando câmaras microfluídicas

Comece com uma placa microfluídica preenchida com um meio nutriente pré-aquecido.

Fixe a placa ao sistema coletor e vede a configuração. Conduza o meio pelos canais para remover quaisquer bolhas de ar.

Coloque a configuração em uma platina de microscópio e pré-aqueça para evitar a expansão da placa durante a geração de imagens.

Em seguida, remova o meio, introduza uma cultura bacteriana nas entradas das células e um meio indutor de estresse nas entradas da solução.

O meio indutor de estresse contém um antibiótico que interrompe a divisão celular sem inibir o aumento da massa celular.

Sele o sistema e, em seguida, inicie o carregamento celular para transferir as bactérias para a câmara de cultura da placa.

Usando luz transmitida, localize um campo de visão contendo células individuais distribuídas uniformemente.

Injete na câmara o meio indutor de estresse para expor as células ao antibiótico.

Usando o modo de contraste de fase, capture imagens de lapso de tempo para observar a formação de células filamentosas alongadas com aumento do conteúdo de DNA causado pela inibição da divisão celular mediada por antibióticos.

Primeiro, remova a solução de conservação da placa microfluídica e substitua-