Avaliação da filamentação induzida por antibióticos em E. coli usando ensaio de plaqueamento e citometria de fluxo

Comece com uma cultura de E. coli pré-tratada com um antibiótico.

Este antibiótico bloqueia a divisão celular, resultando na formação de células filamentosas alongadas com aumento do conteúdo de DNA.

Coloque uma parte da cultura em uma placa de ágar rica em nutrientes e incuba.

As células filamentosas não se dividem apesar do crescimento contínuo; apenas células não filamentosas formam colônias, resultando em baixa contagem de colônias.

Dilua a cultura bacteriana restante e adicione um corante fluorescente de ligação ao DNA. Em seguida, incube no escuro.

O corante entra nas células e se liga ao DNA.

Vortex a amostra e depois passá-la por um citômetro de fluxo.

A quantidade de luz espalhada de cada célula corresponde ao seu tamanho.

Da mesma forma, a fluorescência emitida pelos ácidos nucléicos ligados ao corante indica o conteúdo de DNA bacteriano.

As células tratadas com antibióticos mostram aumento da dispersão e fluorescência, refletindo o crescimento filamentoso e a replicação contínua do DNA sem divisão.

Isso demonstra modificações na fisiologia bacteriana causadas por antibióticos inibidores da divisão celular.

Preparar diluições seriadas de dez vezes, até 10 elevado a menos sétimo, dos