Avaliação do enxame bacteriano usando uma placa inibidora de gradiente

Pegue um prato de enxame gradiente com ágar de camada dupla. A camada inferior, contendo um inibidor, foi derramada para criar um gradiente do inibidor.

A placa contém poços isometricamente espaçados para fornecer espaço apropriado para enxameação bacteriana ou migração coletiva, evitando sobreposições de enxames.

Inocule os poços com uma cultura bacteriana e incube a placa.

Sob baixas concentrações de inibidores, as bactérias coordenam seu movimento flagelar, iniciando a migração coletiva ou enxameação.

Sob altas concentrações de inibidores, o inibidor suprime a expressão de genes relacionados aos flagelos.

Isso resulta em movimento flagelar limitado, levando a uma motilidade de enxame restrita.

Imagem da placa sob luz branca em intervalos regulares para capturar o padrão de enxameação.

Durante a geração de imagens, ajuste o tempo de exposição para aumentar o brilho dos enxames.

Modifique as configurações de limite para minimizar a interferência da luz de fundo e aumentar o contraste.

Salve a imagem para análise subsequente do efeito da concentração de inibidores no enxame bacteriano.

Adicione 80 microlitros da cultura de crescimento noturno em cada poço. Retire as placas de enxame da incubadora, uma de cada vez, a cada 12 horas e coloque-as no sistema de imagem de gel.

Selecione o modo de imagem de gel, exponha a placa de enxame à luz branca e ajuste a distância focal para obter uma visão clara dos enxames. Aumente o brilho dos enxames para uma observação precisa, ajustando o tempo de exposição para 300 milissegundos. Ajuste o limite para minimizar a interferência da luz de fundo.

Salve o arquivo de imagem para análise posterior.