Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:50 min. • September 26th, 2025
Comece com uma cultura de uma espécie bacteriana que codifica proteínas recombinantes marcadas com o Peptídeo Nucleante da Vesícula, ou VNp, um peptídeo curto que promove a formação de vesículas.
Adicione um indutor à cultura e incuba. O indutor desencadeia a expressão da proteína.
O VNp se incorpora à membrana interna e promove a curvatura da membrana, encapsulando as proteínas marcadas com VNp em vesículas em brotamento.
Transfira o meio rico em vesículas para um tubo. Centrifugue-o para separar o sobrenadante rico em vesículas.
Em seguida, filtre o sobrenadante para remover os contaminantes residuais.
Em seguida, passe o filtrado por outro filtro de membrana para capturar vesículas na superfície da membrana.
Coloque a membrana em um prato e adicione solução salina tamponada com fosfato.
Retire suavemente as vesículas e transfira a suspensão para um tubo limpo.
Sonicar a suspensão para romper as membranas das vesículas e liberar as proteínas.
Centrifugar o lisado para separar os fragmentos da membrana.
O sobrenadante resultante contém proteínas recombinantes purificadas, prontas para análise.
Induza a expressão de proteínas recombinantes do promotor T7 adicionando IPTG a uma concentração fi
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