Inativação de bactérias usando mononucleotídeo de flavina ativado por luz

Comece inoculando uma bactéria patogênica em um tubo contendo um meio líquido.

Incube para promover a proliferação bacteriana e, em seguida, transfira a cultura para tubos frescos.

Gire as células em pellets e descarte o sobrenadante.

Ressuspenda os pellets bacterianos em soluções tampão contendo concentrações crescentes de mononucleotídeo de flavina (FMN), um fotossensibilizador e uma solução tampão sem FMN para servir como controle.

Misture bem o conteúdo do tubo e transfira as suspensões para tubos de vidro.

Exponha os tubos à luz visível para fotoativar o FMN, que reage com o oxigênio molecular para gerar espécies reativas de oxigênio (ROS).

As ROS danificam os componentes celulares bacterianos, reduzindo assim a viabilidade bacteriana.

Transfira as alíquotas da amostra para meios sólidos, espalhe-as uniformemente e incube para permitir que as bactérias viáveis sobreviventes se transformem em colônias.

Após a incubação, quantificar as colônias e calcular a porcentagem de redução na viabilidade bacteriana em comparação com o controle para avaliar o efeito dose-dependente do FMN.

Inocule uma colônia de Staphylococcus aureus em 10 mililitros de caldo de lisogenia em um tubo de ensaio com t