Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:19 min. • September 26th, 2025
Pegue seringas contendo tiras poliméricas sem antibióticos e carregadas com antibióticos.
Encha as seringas com uma cultura metabolicamente ativa de bactérias patogénicas.
Incube as seringas com agitação para garantir uma exposição bacteriana uniforme ao meio.
Durante a incubação, os antibióticos da tira carregada se difundem no meio e inibem o crescimento bacteriano.
Na seringa com a tira sem antibióticos, as bactérias proliferam.
Recolha a suspensão bacteriana de cada seringa em tubos de microcentrífuga.
Transfira as alíquotas para uma placa de poços múltiplos.
Adicione uma mistura de reagentes contendo luciferina, enzima luciferase e um agente de lise.
Incube com agitação para permitir a lise bacteriana, que libera componentes celulares, incluindo ATP. O ATP impulsiona a reação luminescente mediada por luciferase.
Usando um leitor de microplacas, registre a luminescência.
A cultura bacteriana exposta à tira carregada de antibióticos exibe luminescência reduzida em comparação com a cultura não exposta a antibióticos.
Essa luminescência reduzida confirma a eficácia antibacteriana da tira carregada de antibióticos.
Coloque as tiras de UHMWPE virgens e carregadas com drogas dentro de uma seringa de três mililitros. Em seguida, aspire a suspensão bacteriana contendo MHB para a seringa através da agulha anexada até a marca de 1,5 mililitro.
Coloque a configuração da seringa em uma incubadora agitada até os pontos de tempo indicados de seis horas e, em seguida, todos os dias até o sétimo dia. Após cada ponto de tempo indicado, retire a configuração da seringa e dispense o meio em um tubo de dois mililitros. Realize um ensaio de viabilidade microbiana em tempo real, conforme descrito no manuscrito, usando 100 microlitros de suspensão bacteriana.