JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 vistas • 1:28 min • October 30th, 2025
Pegue uma cultura de Corynebacterium glutamicum, transformada com um plasmídeo carregando um gene repórter fluorescente a jusante do antiterminador do ácido ribonucléico ou sequência RAT, em uma placa de vários poços.
Durante a transcrição, o RAT-RNA forma uma estrutura de alça de haste que bloqueia a RNA polimerase, interrompendo a expressão do gene repórter.
O plasmídeo também expressa constitutivamente LicV, uma proteína de fusão que compreende a proteína de ligação ao RNA RAT, LicT e o domínio VVD sensível à luz azul.
Na escuridão, o LicV permanece monomérico e não se liga ao cabo-tronco RAT-RNA, que bloqueia a transcrição do gene repórter.
Ilumine a cultura com luz azul para induzir uma mudança conformacional no domínio VVD, que desencadeia a dimerização de LicV.
O LicV dimerizado se liga ao RAT-RNA, desdobrando a estrutura da alça da haste e permitindo que a RNA polimerase transcreva o gene repórter, produzindo a proteína repórter fluorescente.
Observar a cultura ao microscópio de fluorescência.
A forte fluorescência do repórter após a iluminação da luz azul e a fluorescência mínima na escuridão confirmam o controle optogenético bem-sucedido.