Microcalorimetria isotérmica para monitorar a atividade metabólica em bactérias

Pegue diluições seriadas de uma cultura bacteriana e adicione alíquotas em frascos calorimétricos contendo meio de crescimento.

Carregue os frascos selados na placa de vários poços de um microcalorímetro isotérmico para medir a produção de calor metabólico.

O dispositivo é mantido a uma temperatura constante para garantir que o calor detectado se origine exclusivamente do metabolismo bacteriano.

À medida que as bactérias metabolizam nutrientes e proliferam, elas liberam calor que os sensores detectam em tempo real.

Paralelamente, incube frascos idênticos em uma incubadora. Usando um espectrofotômetro, meça a densidade óptica (DO) para monitorar o crescimento bacteriano.

Utilizando os sinais calorimétricos das diluições, construir uma curva de actividade térmica e correlacioná-la com os valores de DO.

Um primeiro pico acentuado indica respiração aeróbica durante o crescimento exponencial.

À medida que o oxigênio se torna limitante, as células mudam para a fermentação anaeróbica, produzindo um segundo pico agudo.

Ao entrar na fase estacionária, a bactéria secreta enzimas para degradar proteínas extracelulares e sustentar o metabolismo, produzindo um pico amplo.