Ensaio de biossensor bacteriano para detecção de mercúrio biodisponível em condições anaeróbicas

Comece com uma configuração de ensaio contendo frascos colocados dentro de uma câmara anaeróbica.

Cada frasco contém meios suplementados com nitrato de sódio, íons de mercúrio e concentrações variadas de sulfato de magnésio.

Gire a configuração para misturar os componentes e, em seguida, incuba.

Durante a incubação, o sulfato de magnésio promove a formação de complexos de mercúrio não biodisponíveis, reduzindo os íons de mercúrio livres e biodisponíveis de maneira dependente da concentração.

Em seguida, adicione biossensores induzidos, bactérias geneticamente modificadas carregando um plasmídeo e misture.

O plasmídeo contém um regulador transcricional responsivo ao mercúrio e um promotor ligado a um gene repórter fluorescente.

Em condições anaeróbicas, as bactérias utilizam nitrato para respirar.

Os íons de mercúrio livres entram nas células, ligam-se ao regulador transcricional e ativam o gene fluorescente, produzindo proteínas fluorescentes.

Transfira alíquotas de cada frasco para injetáveis para uma placa de vários poços.

Usando um leitor de placas, meça a intensidade da fluorescência.

Uma diminuição na fluorescência com o aumento das concentrações de sulfato de magnésio confirma a capaci