Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:15 min. • October 30th, 2025
Pegue uma lâmina contendo esporos bacterianos dormentes e microesferas fluorescentes como referência.
Os esporos carregam repórteres fluorescentes vermelhos e verdes para proteínas de germinação, com a membrana interna corada com um corante lipofílico.
Monte a lâmina em um microscópio de iluminação estruturada ou SIM equipado com uma objetiva de imersão em óleo.
Localize as microesferas fluorescentes e ajuste o foco para minimizar o desfoque da imagem.
Em seguida, use a luz transmitida para localizar os esporos bacterianos.
Mude para o modo SIM e ilumine os esporos para excitar os fluoróforos.
Adquira imagens de fluorescência de alta resolução em toda a profundidade dos esporos.
Na membrana interna corada com corante lipofílico, as proteínas de germinação aparecem como focos vermelhos e verdes distintos. Isso permite um mapeamento preciso da localização das proteínas de germinação dentro dos esporos bacterianos.
Para imagens das amostras, coloque a lâmina em um microscópio de iluminação estruturada equipado com uma objetiva de óleo 100X e concentre-se nas microesferas fluorescentes de 100 nanômetros.
Ajuste o anel de correção na objetiva de 100X até que uma função de propagação de ponto sim
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