JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologia
0 vistas • 2:28 min • October 30th, 2025
Comece com uma lamínula de vidro semeada com uma cocultura de bactérias móveis marcadas com fluorescência e bactérias imóveis não rotuladas.
Pegue o prato que contém uma almofada de agarose com infusão de nutrientes e remova cuidadosamente o molde de silicone ao redor.
Incline o prato e use uma espátula dobrada para deslizar sob a borda da almofada. Em seguida, coloque-o na tampa de uma placa de Petri.
Transfira a almofada, com a parte inferior para baixo, para o prato que contém as células bacterianas para garantir um contato uniforme com a camada bacteriana.
Pressione suavemente a almofada para eliminar quaisquer bolhas de ar.
Coloque os lenços umedecidos ao redor da borda do prato para manter a umidade.
Sob um microscópio invertido, rastreie o comportamento bacteriano ao longo de um período de tempo.
À medida que as bactérias crescem, as bactérias imóveis liberam atrativos químicos. As bactérias móveis sentem esses sinais e se movem em direção às colônias bacterianas imóveis.
Com o tempo, as bactérias móveis se acumulam e invadem colônias bacterianas imóveis, confirmando as interações bacterianas.
Quando as almofadas estiverem secas, pipete um microlitro de co-cultura uniformemente no fundo de uma lamínula de vidro estéril pré-aquecida de 35 milímetros.
Remova o recorte de silicone do molde de agarose usando uma pinça estéril, incline-o para o lado e deslize uma espátula levemente dobrada sob a borda da almofada de agarose para soltá-la em uma tampa de placa de Petri estéril.
Transfira a almofada para o prato com as células bacterianas, com a parte inferior voltada para baixo, deslizando uma espátula em ângulo de 90 graus sob a almofada e colocando-a em cima da lamínula inoculada. Use a espátula para nivelar a almofada contra a lamínula e pressione suavemente as bolhas de ar.
Remova o excesso de umidade do lenço umedecido e coloque-o ao redor da borda do prato, certificando-se de que não toque na almofada. A amostra agora está pronta para geração de imagens.